字季长，茂陵(今兴平东北)人。马严之子，曾任主管朝廷宫室、宗庙、陵墓工程营建的将作大匠，为官清正，颇有名望。自幼聪慧好学，才学出众，闻名乡里。其师 “名重关西” 的挚恂，对他特别器重，把女儿嫁给他。安帝永初四年(110)入朝担任校书郎中，长期在东观典校书籍。班固的《汉书》出版后，跟班昭学习《汉书》。当时安帝年幼，邓太后临朝，邓骘兄弟辅政，外扰内灾，朝廷由盛而衰。他担忧发生变乱，于元初二年(115)写了《广成颂》，请求安帝巡幸广成苑(在今河南临汝) “讲武校猎” ，以示重视武力。反复强调 “安不忘危，治不忘乱” 的道理。当时安帝年仅十三岁，邓太后已临朝掌权十年，她认为这篇颂辞是影射自己，下令对他 “禁锢” ，十年不得升调。无奈辞官，返归故里，授徒著述。在授徒中，为了测验学生听讲的注意力和自己讲学的效果，在讲经台中间拉上绛色纱帐，他在帐前讲学，让女乐歌伎在帐后弹琴、吹笛、唱歌、跳舞。由于他讲课内容深刻，语言生动，吸引住了学生，感觉不到帐后有莺歌燕舞。因此，他讲学的名声大振，远近好学者纷纷前来听讲，讲经台前人山人海，商贩也在讲经台附近摆摊设点，逐渐形成一个小镇，民间传说是今扶风县的绛帐镇。永宁二年(121)，邓太后死，安帝亲政，又起用了他。延光三年(124)，适逢安帝东巡泰山，他写《东巡颂》，颂扬安帝东巡泰山和亲政后的作为，得到安帝赏识，复任郎中，在东观讲经。阳嘉二年(133)，参加了顺帝主持的对策应试，被举为议郎。后任武都、南郡太守，为官清正，政绩显著，受民拥戴，但因得罪外戚梁冀被免官，再返洛阳东观，专心讲学、著述。教徒千余人，遍及全国。许多人不能直接听讲，只能作再传弟子，有数千人。弟子中有郑玄、卢植等很多名人。特别是郑玄(是他茂陵所授门徒)，后来成为汉代经学的集大成者，人称其学为 “郑学” 。先后注释《诗经》 《易经》《尚书》 《周礼》 《仪礼》 《论语》 《孝经》等儒家经典，撰著了对《春秋》三传加以比较研究的《三传异同说》。还注释了《老子》 《淮南子》 《离骚》 《列女传》等政论、文学、历史方面的书籍。著述赋、颂、碑、诗、书、记、表、奏、七言、琴歌、对策、遗令等21篇。其中《长笛赋》是讲音乐的著名作品，被南朝萧统收入《昭明文选》。他善弹琴，好吹笛，在音乐上很有造诣。原著多已失散，现存明末张溥所辑《马季长集》。他的最大成就是对古文经学的研究传播，总结深化了贾逵等人的成果，从而使古文经学在东汉学术界占据了主导地位。同时，在注疏中通过辨认解释先秦字词，建立了比较系统完整的训诂方法，为后代整理古籍和研究语言文字留下宝贵财富，在中国文化发展史上占有重要地位。

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